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Gianluca Frustagli
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Gianluca Frustagli [Next Generation Sequencing (NGS)]
Linea 3: Linea 3:
 **Area** **Area**
  
-====== ​Sequenziamento ​(NGS) ======+====== ​Next Generation Sequencing ​(NGS) ======
  
-I PGM (personal genome machines) sono sequenziatori di seconda generazione (//Next Generation Sequencing//,​ NGS), studiati per piccoli laboratori, che hanno una capacità inferiore rispetto ad altri sequenziatori ma che presentano gli stessi vantaggi di velocità, accuratezza e costi ridotti.+<WRAP tabs> 
 +  * [[aree:​ngs:​start|Missione]] 
 +  * [[aree:​ngs:​strumenti|Strumentazione]] 
 +  * [[aree:​ngs:​servizi|Servizi]] 
 +  * [[aree:​ngs:​eventi|Eventi]] 
 +  * [[aree:​ngs:​richiesta|Richieste]] 
 +  * [[aree:​ngs:​chi_siamo|Chi siamo]] 
 +</WRAP> 
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 +{{ :​aree:​ngs:​lab_ngs.jpeg |}}
  
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-==== Strumento ====+L'area NGS ha come obiettivo di offrire tecnologie di sequenziamento all’avanguardia e dati di alta qualità a ricercatori dell'​ISS e di istituzioni esterne, sia accademiche che private.
  
-Il nostro servizio di sequenziamento ​dispone di un <wrap em>​[[https://​www.thermofisher.com/​us/​en/​home/​life-science/sequencing/next-generation-sequencing/​ion-torrent-next-generation-sequencing-workflow/​ion-torrent-next-generation-sequencing-run-sequence/​ion-pgm-system-for-next-generation-sequencing.html|Ion Torrent PGM]]</​wrap>​ che sfrutta la tecnologia del sequenziamento tramite un CHIP a semiconduttore.+Il personale esperto dell’area NGS accompagna il ricercatore in tutte le fasi: dalla progettazione sperimentale al dato finale per applicazioni quali il sequenziamento ​microbico (SWGS, sia re-sequencing ​che de novo, 16S, RNAseq), sequenziamento mirato del DNA e dell’RNA basato sulla tecnologia Ampliseq (transcrittoma umano e murino, pannello Sars-CoV-2, altri pannelli specifici), esoma, RNA totale, microRNA, LncRNA, DNA circolante (ctDNA), amplicon ​sequencing.
  
-{{:​aree:​ngs:​strumento.png?​0x300|Lo strumento}} {{:​aree:​ngs:​chip.png?​0x300|Il chip a semiconduttore}} \\ +La facility NGS collabora con i ricercatori,​ sia interni all’ISS che esterni, per l’implementazione di nuove applicazioniLa facility inoltre supporta i ricercatori nella preparazione di domande di finanziamento di progetti che implichino Next Generation Sequencing e single cell OMICs.
-<wrap lo>A sinistra: lo strumento -- a destra: il chip a semiconduttore</​wrap>​+
  
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-==== Principio di funzionamento ====+<WRAP center round info 65%> 
 +{{:​aree:​in_collaborazione:​biofab_research:​biofab_research.png?​200}}
  
-{{ funzionamento.png?350|}} Ogniqualvolta un nucleotide viene incorporato sul filamento in crescita viene rilasciato un protone: le variazioni ​di pH che avvengono all'interno dei singoli pozzetti che costituiscono il CHIP sono rilevate dallo strumento che associa ad ogni variazione l'​incorporazione di un nucleotide, trasformando il segnale chimico in segnale digitalePoiché ogni nucleotide viene interrogato singolarmente (vale a dire che il filamento in crescita viene esposto ad un nucleotide per volta) si ha segnale solo se il nucleotide viene incorporato.+Dal 21/09/2018 l'ISS ha stabilito una collaborazione scientifica con la **[[https://​www.biofabresearch.it|Bio-Fab Research]]** con lo scopo di integrare ed ampliare i servizi della facility NGS FAST dell'ISS... [[aree:​in_collaborazione:​biofab_research:​|[leggi di più]]] 
 +</​WRAP>​ 
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-Poiché questo sistema non utilizza molecole fluorescenti l'​analisi ​è più semplice e meno costosa, non richiedendo né rivelatori di fluorescenza né elaborati sistemi di analisi.+==== Per accedere al servizio ​è necessario: ====
  
-La lunghezza dei frammenti sequenziabili è al massimo di 500 bp e si possono analizzare più campioni in parallelo utilizzando //barcode// specifici per ogni campioneLe analisi richiedono una quantità materiale ​di partenza compreso tra 10 e 100 ng (circa 10 ng/µLper il DNA.+  - Contattare preliminarmente il personale dell'​[[ngs.fast@iss.it|area NGS]]; 
 +  - compilare il modulo online '​**[[richiesta|Richiesta Servizio]]**'​ illustrando brevemente la problematica scientifica,​ tipologia ​di campione ​(DNA, RNA etc.), numero di campioni da sequenziare etc.; 
 +  - verrà quindi fissato un incontro con il personale dell'​area per discutere le modalità di analisi, i costi, la tempistica etc.
  
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-> Referente: [[fiorella.ciaffoni@iss.it|Fiorella Ciaffoni]] +> Referente: [[manuela.marra@iss.it|Manuela Marra]] 
-> ☎ **+39 06 4990 3074/3051**+> ☎ **+39 06 4990 3051**