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-{{:​aree:​proteomica:​rppa:​rppa-lab.jpeg?​300 |Laboratorio RPPA}} La tecnologia dei Reverse-Phase Protein microArrays (RPPA) è una piattaforma di analisi molecolare basata sull’utilizzo di anticorpi specifici e sfrutta i principi dell’amplificazione del segnale utilizzati nella diagnostica clinica, per misurare i livelli di centinaia di proteine e le loro modificazioni post-traduzionali (e.g. fosfo-proteine) su un numero elevato di estratti proteici((Mueller C, Liotta LA, Espina V. Reverse phase protein microarrays advance to use in clinical trials. Mol Oncol. 2010 Dec;​4(6):​461-81. doi: 10.1016/​j.molonc.2010.09.003. Epub 2010 Oct 16.))((Wulfkuhle JD et al. Technology insight: pharmacoproteomics for cancer--promises of patient-tailored medicine using protein microarrays. Nat Clin Pract Oncol. 2006 May;​3(5):​256-68.))((Gallagher RI, Espina V. Reverse phase protein arrays: mapping the path towards personalized medicine. Mol Diagn Ther. 2014 Dec;​18(6):​619-30. doi: 10.1007/​s40291-014-0122-3.)). Questa tecnologia permette di utilizzare campioni di varia natura: porzioni di tessuto tumorale, liquidi biologici come ad esempio siero o liquido cefalorachidiano e cellule tumorali derivate da pazienti e coltivate in vitro((Locard-Paulet M et al. Phosphoproteomic analysis of interacting tumor and endothelial cells identifies regulatory mechanisms of transendothelial migration. Sci Signal. 2016 Feb 9;​9(414):​ra15. doi: 10.1126/​scisignal.aac5820.))((Santacatterina F et al. Quantitative analysis of proteins of metabolism by reverse phase protein microarrays identifies potential biomarkers of rare neuromuscular diseases. J Transl Med. 2015 Feb 18;13:65. doi: 10.1186/​s12967-015-0424-1.))((Gujral TS et al. Profiling phospho-signaling networks in breast cancer using reverse-phase protein arrays. Oncogene. 2013 Jul 18;​32(29):​3470-6. doi: 10.1038/​onc.2012.378. Epub 2012 Sep 3.))((Akbani R et al. A pan-cancer proteomic perspective on The Cancer Genome Atlas. Nat Commun. 2014 May 29;5:3887. doi: 10.1038/​ncomms4887.)).+{{:​aree:​proteomica:​rppa:​rppa-lab.jpeg?​300 |Laboratorio RPPA}} La tecnologia dei Reverse-Phase Protein microArrays (RPPA) è una piattaforma di analisi molecolare basata sull’utilizzo di anticorpi specifici e sfrutta i principi dell’amplificazione del segnale utilizzati nella diagnostica clinica, per misurare i livelli di centinaia di proteine e le loro modificazioni post-traduzionali (e.g. fosfo-proteine) su un numero elevato di estratti proteici((Mueller C, Liotta LA, Espina V. [[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​20974554|Reverse phase protein microarrays advance to use in clinical trials.]] Mol Oncol. 2010 Dec;​4(6):​461-81. doi: 10.1016/​j.molonc.2010.09.003. Epub 2010 Oct 16.))((Wulfkuhle JD et al. [[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​16683004|Technology insight: pharmacoproteomics for cancer--promises of patient-tailored medicine using protein microarrays.]] Nat Clin Pract Oncol. 2006 May;​3(5):​256-68.))((Gallagher RI, Espina V. [[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​25358623|Reverse phase protein arrays: mapping the path towards personalized medicine.]] Mol Diagn Ther. 2014 Dec;​18(6):​619-30. doi: 10.1007/​s40291-014-0122-3.)). Questa tecnologia permette di utilizzare campioni di varia natura: porzioni di tessuto tumorale, liquidi biologici come ad esempio siero o liquido cefalorachidiano e cellule tumorali derivate da pazienti e coltivate in vitro((Locard-Paulet M et al. [[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​26861043|Phosphoproteomic analysis of interacting tumor and endothelial cells identifies regulatory mechanisms of transendothelial migration.]] Sci Signal. 2016 Feb 9;​9(414):​ra15. doi: 10.1126/​scisignal.aac5820.))((Santacatterina F et al. [[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​25880557|Quantitative analysis of proteins of metabolism by reverse phase protein microarrays identifies potential biomarkers of rare neuromuscular diseases.]] J Transl Med. 2015 Feb 18;13:65. doi: 10.1186/​s12967-015-0424-1.))((Gujral TS et al. [[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​22945653|Profiling phospho-signaling networks in breast cancer using reverse-phase protein arrays.]] Oncogene. 2013 Jul 18;​32(29):​3470-6. doi: 10.1038/​onc.2012.378. Epub 2012 Sep 3.))((Akbani R et al. [[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​24871328|A pan-cancer proteomic perspective on The Cancer Genome Atlas.]] Nat Commun. 2014 May 29;5:3887. doi: 10.1038/​ncomms4887.)).
  
 L’unità ha acquisito esperienza specifica in campo oncologico e in particolare:​ L’unità ha acquisito esperienza specifica in campo oncologico e in particolare:​
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 Un'​applicazione innovativa è il riposizionamento,​ in diversi ambiti terapeutici,​ di farmaci approvati studiandone gli effetti sulle reti di trasduzione del segnale. Un'​applicazione innovativa è il riposizionamento,​ in diversi ambiti terapeutici,​ di farmaci approvati studiandone gli effetti sulle reti di trasduzione del segnale.
  
-La strumentazione avanzata dell'​unità comprende: un microdissettore a laser infrarosso per isolare specifiche porzioni di tessuto, un arrayer robotico per la microdeposizione dei campioni proteici su vetrini ricoperti da nitrocellulosa,​ un Autostainer per effettuare le immunocolorazioni e l'​amplificazione del segnale in modo automatizzato,​ uno scanner a fluorescenza per digitalizzare i vetrini immunocolorati e una piattaforma software per l'​analisi di immagine che consente la quantificazione e la normalizzazione del segnale. <wrap hi>​Questa dotazione rende l'​unità di RPPA unica in Italia</​wrap>​. Inoltre, in __{{pathway_anticorpi-rppa-iss.xlsx|Tabella 1}}__ è riassunto il numero di anticorpi validati per più di 20 vie di trasduzione del segnale per un totale di circa __{{validated_antibodies-rppa-iss.xlsx|400 anticorpi validati}}__,​ la maggior parte diretti contro proteine fosforilate o altre modifiche post-traduzionali. Nuovi anticorpi vengono validati, di volta in volta, e aggiunti alla banca a seconda delle diverse esigenze progettuali.+La strumentazione avanzata dell'​unità comprende: un microdissettore a laser infrarosso per isolare specifiche porzioni di tessuto, un arrayer robotico per la microdeposizione dei campioni proteici su vetrini ricoperti da nitrocellulosa,​ un Autostainer per effettuare le immunocolorazioni e l'​amplificazione del segnale in modo automatizzato,​ uno scanner a fluorescenza per digitalizzare i vetrini immunocolorati e una piattaforma software per l'​analisi di immagine che consente la quantificazione e la normalizzazione del segnale. <wrap hi>​Questa dotazione rende l'​unità di RPPA unica in Italia</​wrap>​. Inoltre, in __{{:​aree:​proteomica:​rppa:​pathway_anticorpi-rppa-iss.xlsx|Tabella 1}}__ è riassunto il numero di anticorpi validati per più di 20 vie di trasduzione del segnale per un totale di circa __{{:​aree:​proteomica:​rppa:​validated_antibodies-rppa-iss.xlsx|400 anticorpi validati}}__,​ la maggior parte diretti contro proteine fosforilate o altre modifiche post-traduzionali. Nuovi anticorpi vengono validati, di volta in volta, e aggiunti alla banca a seconda delle diverse esigenze progettuali.
  
 L'​unità di RPPA collabora con l'​Istituto Nazionale Tumori di Milano, l'​Istituto Nazionale Tumori Regina Elena, l'​Università degli Studi di Roma "Tor Vergata",​ l'​Università Cattolica del Sacro Cuore e l'​Università degli Studi di Palermo. L'​unità di RPPA collabora con l'​Istituto Nazionale Tumori di Milano, l'​Istituto Nazionale Tumori Regina Elena, l'​Università degli Studi di Roma "Tor Vergata",​ l'​Università Cattolica del Sacro Cuore e l'​Università degli Studi di Palermo.
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 L'​unità fornisce eventuale supporto tecnico-scientifico per l'​estrazione delle proteine, la scelta mirata degli anticorpi da studiare e l'​analisi statistico/​bioinformatica dei dati normalizzati. L'​unità fornisce eventuale supporto tecnico-scientifico per l'​estrazione delle proteine, la scelta mirata degli anticorpi da studiare e l'​analisi statistico/​bioinformatica dei dati normalizzati.
  
-Per accedere al servizio è necessario compilare il modulo on-line [[aree:​proteomica:​rppa:​richiesta|Richiesta Servizio]]. Sarete contattati per un incontro preliminare. ​+\\
  
-> Contatto[[michele.signore@iss.it|Michele Signore]] +=== Per accedere al servizio è necessario===
-> Tel.: **06 4990 4453** +
-> Dove siamo: **GB BS, stanza 7**+
  
-FIXME Aggiungere link agli articoli citati+  - contattare preliminarmente il [[chi_siamo|personale dell'​unità RPPA]]; 
 +  - compilare il modulo online '​**[[richiesta|Richiesta Servizio]]**'​ illustrando brevemente la problematica scientifica,​ tipologia e numero di campioni, etc.; 
 +  - verrà quindi fissato un incontro con il personale dell'​unità per discutere le modalità di analisi, i costi, la tempistica etc.  
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 +\\ 
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 +> Contatto: [[michele.signore@iss.it|Michele Signore]] 
 +> ☎ **+39 06 4990 4453** 
 +> Dove siamo: **GB-BS, stanza 7**