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aree:proteomica:ms:start [2017/11/16 19:43]
Gianluca Frustagli
aree:proteomica:ms:start [2023/03/03 21:19]
Gianluca Frustagli Aggiornamento per nuovi strumenti (in corso...).
Linea 11: Linea 11:
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-{{:​aree:​proteomica:​ms:​lab.jpeg?​400 |}} L'​unità è dotata di uno spettrometro ​di massa **LTQ XL Ion Trap** della ThermoFisher con frammentazione ETD (Electron ​Transfer Dissociationsupplementare(([[http://​www.pnas.org/​cgi/​content/​full/​101/​26/​9528|Peptide and protein sequence analysis by electron transfer dissociation mass spectrometry]])).+{{:​aree:​proteomica:​ms:​lab.jpeg?​400 |}} L'​unità è dotata di due Tribrid Orbitrap Fusion, spettrometri ​di massa ad alta risoluzione. L’architettura tri-ibrida combina tre analizzatori di massa: il quadrupolo, la trappola ionica e l’Orbitrap. Le tecniche di frammentazione ​impiegate sono multiple: CID (Collision Induced Dissociation),​ HCD (Higher-energy Collisional Dissociation) e ETD (Electron ​transfer dissociation) (([[http://​www.pnas.org/​cgi/​content/​full/​101/​26/​9528|Peptide and protein sequence analysis by electron transfer dissociation mass spectrometry]])). E’ presente anche una interfaccia FAIMS (field asymmetric-waveform ion-mobility spectrometry).
  
-Questo strumento ​in-line con un cromatografo ​nano-capillare permette ​la separazione di miscele peptiche più o meno complesse e la susseguente identificazione delle proteine costituenti attraverso software dedicati (analisi LC-MS/MS). Questa strumentazione è di grande supporto in quei progetti di ricerca biomedica in cui si è interessati all'​individuazione e/o caratterizzazione di proteine e del loro livello di espressione. I campioni da analizzare possono essere molteplici: proteine sintetiche, proteine semi-purificate,​ immuno-precipitazioni,​ sub-proteomi,​ proteomi totali. Generalmente,​ l’analisi LC-MS/MS è preceduta da elettroforesi (PAGE) per una stima qualitativa e quantitativa del campione seguita da digestione ​ +§§§§ 
-in-gel delle proteine. ​+ 
 +Questi strumenti, //in linea// ​con cromatografi ​nano-capillari, permettono ​la separazione di miscele peptiche più o meno complesse e la susseguente identificazione delle proteine costituenti attraverso software dedicati (analisi LC-MS/MS). Questa strumentazione è di grande supporto in quei progetti di ricerca biomedica in cui si è interessati all'​individuazione e/o caratterizzazione di proteine e del loro livello di espressione. I campioni da analizzare possono essere molteplici: proteine sintetiche, proteine semi-purificate,​ immuno-precipitazioni,​ sub-proteomi,​ proteomi totali. Generalmente,​ l’analisi LC-MS/MS è preceduta da elettroforesi (PAGE) per una stima qualitativa e quantitativa del campione seguita da digestione in-gel delle proteine. ​
  
 In caso di campioni molto poveri o per necessità metodologiche,​ la digestione può essere effettuata in soluzione e seguita da cromatografia off-line prima dell’analisi LC-MS/​MS(([[http://​www.nature.com/​nmeth/​journal/​v6/​n5/​abs/​nmeth.1322.html|Universal sample preparation method for proteome analysis]])). Negli studi comparativi è possibile la determinazione quantitativa relativa attraverso tecniche di marcatura isotopica(([[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​17902639|iTRAQ Reagent-Based Quantitative Proteomic Analysis on a Linear Ion Trap Mass Spectrometer]]))(([[http://​www.neurology.org/​content/​79/​10/​1012.abstract|Increased levels of acute-phase inflammatory proteins in plasma of patients with sporadic CJD]])) o label-free(([[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​23794183|Critical assessment of proteome-wide label-free absolute abundance estimation strategies]])). L'​unità si avvale in particolare di un'​ampia esperienza nei seguenti ambiti: In caso di campioni molto poveri o per necessità metodologiche,​ la digestione può essere effettuata in soluzione e seguita da cromatografia off-line prima dell’analisi LC-MS/​MS(([[http://​www.nature.com/​nmeth/​journal/​v6/​n5/​abs/​nmeth.1322.html|Universal sample preparation method for proteome analysis]])). Negli studi comparativi è possibile la determinazione quantitativa relativa attraverso tecniche di marcatura isotopica(([[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​17902639|iTRAQ Reagent-Based Quantitative Proteomic Analysis on a Linear Ion Trap Mass Spectrometer]]))(([[http://​www.neurology.org/​content/​79/​10/​1012.abstract|Increased levels of acute-phase inflammatory proteins in plasma of patients with sporadic CJD]])) o label-free(([[https://​www.ncbi.nlm.nih.gov/​pubmed/​23794183|Critical assessment of proteome-wide label-free absolute abundance estimation strategies]])). L'​unità si avvale in particolare di un'​ampia esperienza nei seguenti ambiti:
Linea 26: Linea 27:
 Sono disponibili diversi approcci di analisi bioinformatica per l'​analisi dei risultati. Sono disponibili diversi approcci di analisi bioinformatica per l'​analisi dei risultati.
  
-Per accedere al servizio è necessario compilare il modulo ​__[[aree:​proteomica:​ms:​richiesta|Richiesta Servizio]]__Sarete contattati per un incontro ​preliminare+\\ 
 + 
 +=== Per accedere al servizio è necessario: === 
 + 
 +  - contattare preliminarmente il [[chi_siamo|personale dell'​unità MS]]; 
 +  - compilare il modulo ​online '**[[richiesta|Richiesta Servizio]]**' illustrando brevemente la problematica scientifica,​ tipologia e numero di campioni etc.
 +  - verrà quindi fissato ​un incontro ​con il personale dell'​unità per discutere le modalità di analisi, i costi, la tempistica etc. 
 + 
 +<wrap em>Si consiglia di attenersi a quanto riportato nella sezione __[[linee_guida|Linee Guida]]__ durante la preparazione del campione.</​wrap>​
  
-Si consiglia di attenersi a quanto riportato nella sezione __[[linee_guida|Linee Guida]]__ durante la preparazione del campione.+\\
  
-> Contatto: [[marta.ponzi@iss.it|Marta Ponzi]] +> Contatto: [[serena.camerini@iss.it|Serena Camerini]] 
-> ☎ **+39 06 4990 3134**+> ☎ **+39 06 4990 3164** 
 +> Fax **+39 06 4990 2040**
 > Dove siamo: edificio **30**, piano **A**, stanza **11** > Dove siamo: edificio **30**, piano **A**, stanza **11**