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aree:proteomica:biacore:metodica [2021/11/30 13:58]
Gianluca Frustagli
aree:proteomica:biacore:metodica [2022/02/24 17:11]
Gianluca Frustagli [Il Sensogramma]
Linea 40: Linea 40:
 Il protocollo sperimentale viene elaborato grazie ad una interfaccia grafica che dichiara le operazioni che lo strumento dovrà svolgere durante l’esperimento definendo dei Report Point, dei descrittori e dei volumi da iniettare nel circuito fluidico. Una volta definito il protocollo sperimentale e caricati i campioni in un vassoio a revolver l’esperimento può iniziare. Il protocollo sperimentale viene elaborato grazie ad una interfaccia grafica che dichiara le operazioni che lo strumento dovrà svolgere durante l’esperimento definendo dei Report Point, dei descrittori e dei volumi da iniettare nel circuito fluidico. Una volta definito il protocollo sperimentale e caricati i campioni in un vassoio a revolver l’esperimento può iniziare.
  
 +{{ :​aree:​proteomica:​biacore:​absolute_response.png |}}
 +
 +Dopo un certo tempo di perfusione del campione, il sistema effettua un lavaggio con il //running buffer// durante il quale si ha il distacco delle molecole di analita che hanno interagito con il ligando. Infine, viene flussato un //tampone rigenerante//​ tipicamente molto salino e basico che consente di staccare tutte le molecole di analita dal ligando, rendendo disponibile il chip ad un nuovo ciclo di legame-distacco.
  
 ===== Il Sensogramma ===== ===== Il Sensogramma =====
Linea 45: Linea 48:
 {{ :​aree:​proteomica:​biacore:​il_sensogramma.png?​400 |}} {{ :​aree:​proteomica:​biacore:​il_sensogramma.png?​400 |}}
  
-Dal sensogramma possibile evincere sia informazioni cinetiche quali l’associazione e la dissociazione,​ fittando i dati ottenuti sperimentalmente con dei modelli teorici noti, come pure informazioni di tipo termodinamico (Entalpia, Entropia e Energia libera di Gibbs) legati al fatto che gli esperimenti possono essere fatti a temperatura controllata tra 4 e 45 °C.+Dal sensogramma ​è possibile evincere sia informazioni cinetiche quali l’associazione e la dissociazione,​ fittando i dati ottenuti sperimentalmente con dei modelli teorici noti, come pure informazioni di tipo termodinamico (Entalpia, Entropia e Energia libera di Gibbs) legati al fatto che gli esperimenti possono essere fatti a temperatura controllata tra 4 e 45 °C.