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aree:proteomica:biacore:metodica [2021/11/30 13:58] Gianluca Frustagli |
aree:proteomica:biacore:metodica [2022/02/24 17:11] Gianluca Frustagli [Il Sensogramma] |
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Il protocollo sperimentale viene elaborato grazie ad una interfaccia grafica che dichiara le operazioni che lo strumento dovrà svolgere durante l’esperimento definendo dei Report Point, dei descrittori e dei volumi da iniettare nel circuito fluidico. Una volta definito il protocollo sperimentale e caricati i campioni in un vassoio a revolver l’esperimento può iniziare. | Il protocollo sperimentale viene elaborato grazie ad una interfaccia grafica che dichiara le operazioni che lo strumento dovrà svolgere durante l’esperimento definendo dei Report Point, dei descrittori e dei volumi da iniettare nel circuito fluidico. Una volta definito il protocollo sperimentale e caricati i campioni in un vassoio a revolver l’esperimento può iniziare. | ||
+ | {{ :aree:proteomica:biacore:absolute_response.png |}} | ||
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+ | Dopo un certo tempo di perfusione del campione, il sistema effettua un lavaggio con il //running buffer// durante il quale si ha il distacco delle molecole di analita che hanno interagito con il ligando. Infine, viene flussato un //tampone rigenerante// tipicamente molto salino e basico che consente di staccare tutte le molecole di analita dal ligando, rendendo disponibile il chip ad un nuovo ciclo di legame-distacco. | ||
===== Il Sensogramma ===== | ===== Il Sensogramma ===== | ||
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{{ :aree:proteomica:biacore:il_sensogramma.png?400 |}} | {{ :aree:proteomica:biacore:il_sensogramma.png?400 |}} | ||
- | Dal sensogramma possibile evincere sia informazioni cinetiche quali l’associazione e la dissociazione, fittando i dati ottenuti sperimentalmente con dei modelli teorici noti, come pure informazioni di tipo termodinamico (Entalpia, Entropia e Energia libera di Gibbs) legati al fatto che gli esperimenti possono essere fatti a temperatura controllata tra 4 e 45 °C. | + | Dal sensogramma è possibile evincere sia informazioni cinetiche quali l’associazione e la dissociazione, fittando i dati ottenuti sperimentalmente con dei modelli teorici noti, come pure informazioni di tipo termodinamico (Entalpia, Entropia e Energia libera di Gibbs) legati al fatto che gli esperimenti possono essere fatti a temperatura controllata tra 4 e 45 °C. |