Differenze
Queste sono le differenze tra la revisione selezionata e la versione attuale della pagina.
| Entrambe le parti precedenti la revisione Revisione precedente Prossima revisione | Revisione precedente | ||
|
aree:in_collaborazione:luminex:protocolli [2018/08/22 20:01] Gianluca Frustagli |
aree:in_collaborazione:luminex:protocolli [2019/03/27 16:32] (versione attuale) Gianluca Frustagli Aggiunto link alla pagina "Chi siamo". |
||
|---|---|---|---|
| Linea 2: | Linea 2: | ||
| <WRAP tabs> | <WRAP tabs> | ||
| + | * [[start|Presentazione]] | ||
| * [[Protocolli]] | * [[Protocolli]] | ||
| * [[Bibliografia]] | * [[Bibliografia]] | ||
| + | * [[chi_siamo|Chi siamo]] | ||
| </WRAP> | </WRAP> | ||
| ====== Protocolli ====== | ====== Protocolli ====== | ||
| - | * {{#|Protocollo per lisati cellulari}} | + | //I protocolli di seguito riportati sono da considerare come esempio: si consiglia di verificare con i ricercatori dell'unità di analisi che le metodiche e i protocolli utilizzati per manipolazione, raccolta, preparazione e conservazione dei campioni siano adatti all'analisi Luminex (compresi volumi, concentrazioni, congelamenti/scongelamenti, procedure di sicurezza etc.).// |
| - | * {{#|Protocollo per siero}} | + | |
| - | * {{#|Protocollo per mezzi condizionati da cellule}} | + | ===== Protocollo per preparazione e analisi di mezzi condizionati ===== |
| + | |||
| + | :!: **IMPORTANTE**: __il mezzo condizionato (CM) dovrebbe essere preparato con un mezzo di coltura contenente non più di 0,5% siero. Se la concentrazione è maggiore, per favore segnalatelo.__ | ||
| + | |||
| + | - Raccogliere il CM tenendolo su ghiaccio; | ||
| + | - aggiungere inibitori di proteasi e/o di fosfatasi (se il protocollo sperimentale lo consente); | ||
| + | - centrifugare il CM raccolto secondo i protocolli consentiti o consigliati per quella specifica coltura cellulare, per rimuovere frammenti cellulari o grossi aggregati molecolari; | ||
| + | - misurare la concentrazione proteica con il metodo Bradford: in ogni caso, si consiglia di conservare anche le informazioni relative al numero di cellule piastrate per l’esperimento; | ||
| + | - se necessario, eventualmente, è possibile ultracentrifugare il CM per ridurne il volume e così aumentare la concentrazione proteica, usando dei filtri a membrana; | ||
| + | - conservare il CM a -80 °C: la migliore opzione è di conservare sia aliquote da 1-2 ml che alcune da 100-200 µl (utili anche per la determinazione della concentrazione proteica); | ||
| + | - fornire alla unità di analisi anche un campione di bianco (mezzo di coltura addizionato con gli inibitori se sono stati aggiunti; circa 1 ml); | ||
| + | |||
| + | __Per qualunque domanda o chiarimento, contattare l'unità.__ | ||
| + | |||
| + | ===== Analisi Luminex per campioni di siero/plasma ===== | ||
| + | |||
| + | //Protocollo per analisi di siero e plasma e altri campioni biologici (prelievo, preparazione, conservazione).// | ||
| + | |||
| + | Esistono numerosi protocolli per ottenere siero o plasma di buona qualità. Poiché spesso tali protocolli, soprattutto se per campioni da pazienti, rientrano in routine -- non facilmente modificabili -- di laboratorio o di ambulatorio, si consiglia di contattare i ricercatori dell'unità per verificare se il protocollo o il materiale utilizzati per il prelievo, conservazione e stoccaggio dei campioni biologici è adeguato. | ||
| + | |||
| + | **Alcuni semplici consigli:** | ||
| + | |||
| + | - evitare diversi congelamenti/scongelamenti; | ||
| + | - usare materiale sterile; | ||
| + | - preparare aliquote di piccola dimensione (massimo 100 ~ 200 µl); | ||
| + | - usare esclusivamente congelatori -80 °C. | ||
| - | <WRAP center round todo 60%> | ||
| - | Pagina in costruzione | ||
| - | </WRAP> | ||
