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aree:epr:altre_risorse:biacore:metodica [2022/07/27 19:20]
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Gianluca Frustagli Modifiche per spostamento da Area Proteomica ad Area EPR.
Linea 1: Linea 1:
 ~~NOTOC~~ ~~NOTOC~~
  
-**Area ​Proteomica**+**Area ​EPR**
  
 ====== Risonanza Plasmonica di Superficie (SPR - Biacore) ====== ====== Risonanza Plasmonica di Superficie (SPR - Biacore) ======
  
 <WRAP tabs> <WRAP tabs>
-  * [[:​aree:​proteomica:​biacore:​richiesta|Richiesta servizio]] +  * [[richiesta|Richiesta servizio]] 
-  * [[:​aree:​proteomica:​biacore:​start|Introduzione]] +  * [[start|Introduzione]] 
-  * [[:​aree:​proteomica:​biacore:​metodica|Metodica]] +  * [[metodica|Metodica]] 
-  * [[:​aree:​proteomica:​biacore:​applicazioni|Applicazioni]]+  * [[applicazioni|Applicazioni]]
 </​WRAP>​ </​WRAP>​
  
 ==== Descrizione della metodica ==== ==== Descrizione della metodica ====
  
-{{ :aree:proteomica:​biacore:​metodica.png?​600 |}}+{{ :aree:epr:​altre_risorse:​biacore:​metodica.png?​600 |}}
  
 La SPR è sostanzialmente una bilancia molecolare estremamente sensibile, il cui limite di sensibilità inferiore è di circa 100 Da (circa un aminoacido),​ riesce a misurare variazioni di pochi pg/mm² che corrispondono a concentrazioni nel range [pM-nM] all’interno della soluzione bulk. La SPR è sostanzialmente una bilancia molecolare estremamente sensibile, il cui limite di sensibilità inferiore è di circa 100 Da (circa un aminoacido),​ riesce a misurare variazioni di pochi pg/mm² che corrispondono a concentrazioni nel range [pM-nM] all’interno della soluzione bulk.
Linea 25: Linea 25:
 ===== Il sistema SPR - BIACORE ===== ===== Il sistema SPR - BIACORE =====
  
-{{ :aree:proteomica:​biacore:​il_sistema_biacore.png?​600 |}}+{{ :aree:epr:​altre_risorse:​biacore:​il_sistema_biacore.png?​600 |}}
  
 Questo principio viene sfruttato dal **Biacore X-100**, commercializzato da Cytiva. Questo principio viene sfruttato dal **Biacore X-100**, commercializzato da Cytiva.
Linea 41: Linea 41:
 Il protocollo sperimentale viene elaborato grazie ad una interfaccia grafica che dichiara le operazioni che lo strumento dovrà svolgere durante l’esperimento definendo dei Report Point, dei descrittori e dei volumi da iniettare nel circuito fluidico. Una volta definito il protocollo sperimentale e caricati i campioni in un vassoio a revolver l’esperimento può iniziare. Il protocollo sperimentale viene elaborato grazie ad una interfaccia grafica che dichiara le operazioni che lo strumento dovrà svolgere durante l’esperimento definendo dei Report Point, dei descrittori e dei volumi da iniettare nel circuito fluidico. Una volta definito il protocollo sperimentale e caricati i campioni in un vassoio a revolver l’esperimento può iniziare.
  
-{{ :aree:proteomica:​biacore:​absolute_response.png |}}+{{ :aree:epr:​altre_risorse:​biacore:​absolute_response.png |}}
  
 Dopo un certo tempo di perfusione del campione, il sistema effettua un lavaggio con il //running buffer// durante il quale si ha il distacco delle molecole di analita che hanno interagito con il ligando. Infine, viene flussato un //tampone rigenerante//​ tipicamente molto salino e basico che consente di staccare tutte le molecole di analita dal ligando, rendendo disponibile il chip ad un nuovo ciclo di legame-distacco. Dopo un certo tempo di perfusione del campione, il sistema effettua un lavaggio con il //running buffer// durante il quale si ha il distacco delle molecole di analita che hanno interagito con il ligando. Infine, viene flussato un //tampone rigenerante//​ tipicamente molto salino e basico che consente di staccare tutte le molecole di analita dal ligando, rendendo disponibile il chip ad un nuovo ciclo di legame-distacco.
Linea 47: Linea 47:
 ===== Il Sensogramma ===== ===== Il Sensogramma =====
  
-{{ :aree:proteomica:​biacore:​il_sensogramma.png?​400 |}}+{{ :aree:epr:​altre_risorse:​biacore:​il_sensogramma.png?​400 |}}
  
 Dal sensogramma è possibile evincere sia informazioni cinetiche quali l’associazione e la dissociazione,​ fittando i dati ottenuti sperimentalmente con dei modelli teorici noti, come pure informazioni di tipo termodinamico (Entalpia, Entropia e Energia libera di Gibbs) legati al fatto che gli esperimenti possono essere fatti a temperatura controllata tra 4 e 45 °C. Dal sensogramma è possibile evincere sia informazioni cinetiche quali l’associazione e la dissociazione,​ fittando i dati ottenuti sperimentalmente con dei modelli teorici noti, come pure informazioni di tipo termodinamico (Entalpia, Entropia e Energia libera di Gibbs) legati al fatto che gli esperimenti possono essere fatti a temperatura controllata tra 4 e 45 °C.