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Gianluca Frustagli
aree:ngs:start [2020/01/22 08:53] (versione attuale)
Manuela Marra [Per accedere al servizio è necessario:]
Linea 3: Linea 3:
 **Area** **Area**
  
-====== ​Sequenziamento ​======+====== ​Next Generation Sequencing (NGS) ======
  
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-Il servizio ​di sequenziamento ​dispone di un sistema di seconda generazione <wrap em>Ion GeneStudio S5 Next-Generation Sequencing</​wrap>​ che sfrutta la tecnologia del sequenziamento tramite chip semiconduttore (Ion S5 chip) per offrire un’accurata analisi //"​multi-target"//​ a costi contenuti e tempi ridotti rispetto ad altri sistemi di sequenziamento.+<WRAP right round info 50%> 
 +{{:​aree:​in_collaborazione:​biofab_research:​biofab_research.png?​200}} 
 + 
 +Dal 21/09/2018 l'ISS ha stabilito una collaborazione scientifica con la **[[https://​www.biofabresearch.it|Bio-Fab Research]]**. 
 + 
 +Lo scopo di questa collaborazione è di potenziare la facility NGS FAST dell'​ISS con l’inserimento della tecnologia **Illumina**. La Bio-Fab Research da importanza principalmente alla qualità dei servizi cercando di mantenere i prezzi il più possibile accessibili. ​Il valore aggiunto lo si ottiene tramite la collaborazione,​ la competenza e l’interazione con il loro personale... [[aree:​in_collaborazione:​biofab_research:​|[leggi ​di più]]] 
 +</​WRAP>​ 
 + 
 +Il servizio NGS dispone di un sistema di seconda generazione <wrap em>Ion GeneStudio S5 Next-Generation Sequencing</​wrap>​ che sfrutta la tecnologia del sequenziamento tramite chip semiconduttore (Ion S5 chip) per offrire un’accurata analisi //"​multi-target"//​ a costi contenuti e tempi ridotti rispetto ad altri sistemi di sequenziamento.
  
 Ogni qual volta un nucleotide viene incorporato sul filamento in crescita viene rilasciato un protone: le variazioni di pH che avvengono all'​interno nei singoli pozzetti che costituiscono il CHIP sono rilevate dallo strumento che associa ad ogni variazione l'​incorporazione di un nucleotide trasformando il segnale chimico in segnale digitale. Poiché ogni nucleotide viene interrogato singolarmente (vale a dire che il filamento in crescita viene esposto ad un nucleotide per volta) si ha segnale solo se il nucleotide viene incorporato. Ogni qual volta un nucleotide viene incorporato sul filamento in crescita viene rilasciato un protone: le variazioni di pH che avvengono all'​interno nei singoli pozzetti che costituiscono il CHIP sono rilevate dallo strumento che associa ad ogni variazione l'​incorporazione di un nucleotide trasformando il segnale chimico in segnale digitale. Poiché ogni nucleotide viene interrogato singolarmente (vale a dire che il filamento in crescita viene esposto ad un nucleotide per volta) si ha segnale solo se il nucleotide viene incorporato.
Linea 13: Linea 21:
 Poiché questo sistema non utilizza molecole fluorescenti l'​analisi è più semplice e meno costosa non richiedendo né rivelatori di fluorescenza né elaborati sistemi di analisi. Poiché questo sistema non utilizza molecole fluorescenti l'​analisi è più semplice e meno costosa non richiedendo né rivelatori di fluorescenza né elaborati sistemi di analisi.
  
-La lunghezza dei frammenti sequenziabili è al massimo di 600 bp e si possono analizzare più campioni in parallelo utilizzando //​barcodes//​ specifici per ogni campione. Le analisi richiedono una quantità di materiale di partenza compreso tra 10 e 100 ng (circa 10 ng/​µL) ​per il DNA. Sono disponibili chip di 4 dimensioni differenti (Ion chip 510, 520, 530 e 540) che offrono la massima flessibilità e si adattano alle diverse esigenze ed applicazioni consentendo di spaziare dai 2 agli 80 milioni di //reads// per corsa.+La lunghezza dei frammenti sequenziabili è variabile (200, 400 o 600 bp a seconda del quesito scientifico) ​e si possono analizzare più campioni in parallelo utilizzando //​barcodes//​ specifici per ogni campione. Le analisi richiedono una quantità di materiale di partenza compreso tra e 100 ng (circa 10 ng/​µL) ​a seconda dell'​applicazione. Sono disponibili chip di 4 dimensioni differenti (Ion chip 510, 520, 530 e 540) che offrono la massima flessibilità e si adattano alle diverse esigenze ed applicazioni consentendo di spaziare dai 2 agli 80 milioni di //reads// per corsa.
  
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Linea 36: Linea 44:
  
   - **analisi di genomi di piccole dimensioni**;​   - **analisi di genomi di piccole dimensioni**;​
-  - **esoma e trascrittoma**;​ 
   - **targeted sequencing da DNA**: sequenziamento di pannelli di geni ("​inventoried"​ o "​custom"​) correlati a specifiche malattie mendeliane o a determinati tipi di patologie;   - **targeted sequencing da DNA**: sequenziamento di pannelli di geni ("​inventoried"​ o "​custom"​) correlati a specifiche malattie mendeliane o a determinati tipi di patologie;
   - **targeted sequencing da RNA**: sequenziamento di target specifici o gene expression;   - **targeted sequencing da RNA**: sequenziamento di target specifici o gene expression;
Linea 45: Linea 52:
 ==== Per accedere al servizio è necessario: ==== ==== Per accedere al servizio è necessario: ====
  
-  - Contattare preliminarmente il personale dell'​[[ngs.fast@iss.it|area ​sequenziamento]]; +  - Contattare preliminarmente il personale dell'​[[ngs.fast@iss.it|area ​NGS]]; 
-  - compilare il modulo online '**[[aree:ngs:richiesta|Richiesta ​servizio]]**' illustrando brevemente la problematica scientifica,​ tipologia di campione (DNA, RNA etc.), numero di campioni da sequenziare etc.;+  - compilare il modulo online '​**[[richiesta|Richiesta ​Servizio]]**' illustrando brevemente la problematica scientifica,​ tipologia di campione (DNA, RNA etc.), numero di campioni da sequenziare etc.;
   - verrà quindi fissato un incontro con il personale dell'​area per discutere le modalità di analisi, i costi, la tempistica etc.   - verrà quindi fissato un incontro con il personale dell'​area per discutere le modalità di analisi, i costi, la tempistica etc.
  
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-> Referente: [[fiorella.ciaffoni@iss.it|Fiorella Ciaffoni]] +> Referente: [[manuela.marra@iss.it|Manuela Marra]] 
-> ☎ **+39 06 4990 3074/3051**+> ☎ **+39 06 4990 3051**