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aree:citometria:strumentazione:citometro [2020/01/31 12:34] Luca Pasquini |
aree:citometria:strumentazione:citometro [2020/07/01 17:27] (versione attuale) Luca Pasquini |
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| Linea 1: | Linea 1: | ||
| **Area Citometria** | **Area Citometria** | ||
| - | ====== Unità di Citometria di Massa - CyTOF ====== | + | ====== Unità di Citometria di Massa ====== |
| - | La Citometria di Massa è una nuova tecnologia innovativa che si rivolge alle applicazioni che sono tipicamente gestite mediante analisi di citofluorimetria su miscele cellulari ma ne estende la capacità di analisi incrementandone notevolmente il numero di parametri valutabili (1,2). Questa tecnologia si basa sul rilevamento degli antigeni, a livello di singola cellula, mediante l’utilizzo di anticorpi coniugati non più con fluorocromi ma con isotopi purificati di metalli, principalmente Lantanidi. \\ | + | ===== CyTOF (Fluidigm) ===== |
| - | {{:aree:citometria:strumentazione:tavola_lantanidi_cytof.jpg|}} \\ | + | |
| - | La rivelazione degli antigeni bersaglio è effettuata mediante analisi del tempo di volo (TOF) condotto su uno spettrometro di massa a plasma accoppiato induttivamente (ICP-MS), Dalla fusione di queste due tecnologie deriva la denominazione “**//CyTOF//**”. | + | {{ cytof.png?300|CyTOF (Fluidigm)}} |
| + | La Citometria di Massa è una nuova tecnologia innovativa che si rivolge alle applicazioni che sono tipicamente gestite mediante analisi di citofluorimetria su miscele cellulari ma ne estende la capacità di analisi incrementandone notevolmente il numero di parametri valutabili ((Mass cytometry: technique for real time single cell multitarget immunoassay based on inductively coupled plasma time-of-flight mass spectrometry. [[https://pubs.acs.org/doi/10.1021/ac901049w]])) ((Single-Cell Mass Cytometry of Differential Immune and Drug Responses Across a Human Hematopoietic Continuum. [[https://science.sciencemag.org/content/332/6030/687.long]])). Questa tecnologia si basa sul rilevamento degli antigeni, a livello di singola cellula, mediante l’utilizzo di anticorpi coniugati non più con fluorocromi ma con isotopi purificati di metalli, principalmente Lantanidi. \\ | ||
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| + | {{:aree:citometria:strumentazione:tavola_lantanidi_cytof.jpg|}} | ||
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| + | La rivelazione degli antigeni bersaglio è effettuata mediante analisi del tempo di volo (TOF) condotto su uno spettrometro di massa a plasma accoppiato induttivamente (ICP-MS), Dalla fusione di queste due tecnologie deriva la denominazione “**//CyTOF//**”**({{cytof-brochure.pdf|brochure}})**. | ||
| L’utilizzo di isotopi di metalli e l’elevato potere risolutivo offerto dalla spettrometria di massa permette di ridurre notevolmente il fenomeno di sovrapposizione dei segnali tra canali adiacenti, come avviene comunemente in citofluorimetria mediante l’uso di fluorocromi, e del fenomeno di autofluorescenza. Questo consente di incrementare notevolmente il numero di parametri misurabili (>35) a livello di singola cellula. | L’utilizzo di isotopi di metalli e l’elevato potere risolutivo offerto dalla spettrometria di massa permette di ridurre notevolmente il fenomeno di sovrapposizione dei segnali tra canali adiacenti, come avviene comunemente in citofluorimetria mediante l’uso di fluorocromi, e del fenomeno di autofluorescenza. Questo consente di incrementare notevolmente il numero di parametri misurabili (>35) a livello di singola cellula. | ||
| È possibile analizzare contemporaneamente antigeni di superficie ed intracellulari come proteine, incluse fosfoproteine, ed acidi nucleici. | È possibile analizzare contemporaneamente antigeni di superficie ed intracellulari come proteine, incluse fosfoproteine, ed acidi nucleici. | ||
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| + | {{:aree:citometria:strumentazione:workflow_fluidigm_.jpg|}} | ||
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| Il principale impiego della tecnologia è rivolto a studi condotti in campo ematologico, immunologico ed oncologico; alcuni esempi di potenziali applicazioni sono: | Il principale impiego della tecnologia è rivolto a studi condotti in campo ematologico, immunologico ed oncologico; alcuni esempi di potenziali applicazioni sono: | ||
| \\ o 1) Caratterizzazione di popolazioni cellulari e definizione del signalling a livello delle singole sottopopolazioni cellulari; | \\ o 1) Caratterizzazione di popolazioni cellulari e definizione del signalling a livello delle singole sottopopolazioni cellulari; | ||
| Linea 22: | Linea 28: | ||
| L’unità è dotata di un **CyTOF1** che consente l’acquisizione di anticorpi coniugati con isotopi con un range di masse atomiche da 102 a 193. | L’unità è dotata di un **CyTOF1** che consente l’acquisizione di anticorpi coniugati con isotopi con un range di masse atomiche da 102 a 193. | ||
| - | Sono disponibili in commercio anticorpi direttamente coniugati (3) o kit per la preparazione di anticorpi coniugati “in-house” (4). | + | Sono disponibili in commercio anticorpi direttamente coniugati ((https://www.fluidigm.com/catalog?productLines=cyTOF2Instrument&applications=massCytometry&productTypes=primaryAntibodies)) o kit per la preparazione di anticorpi coniugati “in-house” ((https://www.fluidigm.com/catalog?productLines=cyTOF2Instrument&applications=massCytometry&productTypes=labelingKits)). |
| - | Attualmente l’unità collabora attivamente con l’Università degli Studi di Roma “Tor Vergata” e l’università di Helsinki (5). | + | Attualmente l’unità collabora attivamente con l’Università degli Studi di Roma “Tor Vergata” e l’università di Helsinki ((https://project-hercules.eu/)). |
| Il personale dell’area fornisce assistenza per il disegno sperimentale e lo sviluppo del pannello anticorpale. Qualora non fossero disponibili anticorpi già coniugati, il personale fornisce assistenza per la procedura di coniugazione degli anticorpi di interesse. | Il personale dell’area fornisce assistenza per il disegno sperimentale e lo sviluppo del pannello anticorpale. Qualora non fossero disponibili anticorpi già coniugati, il personale fornisce assistenza per la procedura di coniugazione degli anticorpi di interesse. | ||
| - | |||
| - | __Per accedere al servizio è necessario:__ | ||
| - | \\ 1. Contattare preliminarmente il personale dell'unità di **Citometria di Massa**; | ||
| - | \\ 2. Verrà concordato un incontro con il personale dell'unità per discutere la domanda scientifica, le modalità, i costi e la tempistica di analisi; | ||
| - | \\ 3. Compilare il modulo online 'Richiesta Servizio' illustrando brevemente la progettualità, tipologia e numero di campioni etc. | ||
| - | |||
| - | ===== Contatto ===== | ||
| - | **Luca Pasquini**, [[luca.pasquini@iss.it]] | ||
| - | Tel. 0649902143-2530-2576 | ||
| - | Ed. 15, piano A, St. 2 | ||
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| - | ===== CyTOF (Fluidigm) ===== | ||
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| - | {{ cytof.png?300|CyTOF (Fluidigm)}} | ||
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| - | **Caratteristiche tecniche ({{cytof-brochure.pdf|brochure}})** | ||
| - | * analisi multiparametriche (>35 parametri) su singola cellula | ||
| - | * analisi contemporanea di antigeni antigeni di superficie ed intracellulari come proteine, incluse fosfoproteine, ed acidi nucleici | ||
| - | * Principali impieghi in ambito: ematologico, immunologico ed oncologico | ||
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| - | {{:aree:citometria:strumentazione:workflow_fluidigm_.jpg|}} | ||
| - | {{:aree:citometria:strumentazione:tavola_lantanidi_cytof.jpg|}} | ||
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| - | ===== Collegamenti ===== | ||
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| - | (1) Mass cytometry: technique for real time single cell multitarget immunoassay based on inductively coupled plasma time-of-flight mass spectrometry. [[https://pubs.acs.org/doi/10.1021/ac901049w]] | ||
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| - | (2) Single-Cell Mass Cytometry of Differential Immune and Drug Responses Across a Human Hematopoietic Continuum. [[https://science.sciencemag.org/content/332/6030/687.long]] | ||
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| - | (3) https://www.fluidigm.com/catalog?productLines=cyTOF2Instrument&applications=massCytometry&productTypes=primaryAntibodies | ||
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| - | (4) https://www.fluidigm.com/catalog?productLines=cyTOF2Instrument&applications=massCytometry&productTypes=labelingKits | ||
| - | (5) https://project-hercules.eu/ | + | __<wrap bigger>Per accedere al servizio è necessario:</wrap>__ |
| + | - Contattare preliminarmente il personale dell'unità di **Citometria di Massa**; | ||
| + | - Verrà concordato un incontro con il personale dell'unità per discutere la domanda scientifica, le modalità, i costi e la tempistica di analisi; | ||
| + | - Compilare il modulo online 'Richiesta Servizio' illustrando brevemente la progettualità, tipologia e numero di campioni etc. | ||
| + | === Contatto === | ||
| + | **Luca Pasquini**, [[luca.pasquini@iss.it]] \\ | ||
| + | Tel. 0649902143-2530-2576-2531 \\ | ||
| + | Ed. 15, piano A, St. 1 | ||
