Area Citometria

Unità di Citometria di Massa

CyTOF (Fluidigm)

CyTOF (Fluidigm) La Citometria di Massa è una nuova tecnologia innovativa che si rivolge alle applicazioni che sono tipicamente gestite mediante analisi di citofluorimetria su miscele cellulari ma ne estende la capacità di analisi incrementandone notevolmente il numero di parametri valutabili 1) 2). Questa tecnologia si basa sul rilevamento degli antigeni, a livello di singola cellula, mediante l’utilizzo di anticorpi coniugati non più con fluorocromi ma con isotopi purificati di metalli, principalmente Lantanidi.

La rivelazione degli antigeni bersaglio è effettuata mediante analisi del tempo di volo (TOF) condotto su uno spettrometro di massa a plasma accoppiato induttivamente (ICP-MS), Dalla fusione di queste due tecnologie deriva la denominazione “CyTOF”(brochure). L’utilizzo di isotopi di metalli e l’elevato potere risolutivo offerto dalla spettrometria di massa permette di ridurre notevolmente il fenomeno di sovrapposizione dei segnali tra canali adiacenti, come avviene comunemente in citofluorimetria mediante l’uso di fluorocromi, e del fenomeno di autofluorescenza. Questo consente di incrementare notevolmente il numero di parametri misurabili (>35) a livello di singola cellula.

È possibile analizzare contemporaneamente antigeni di superficie ed intracellulari come proteine, incluse fosfoproteine, ed acidi nucleici.

Il principale impiego della tecnologia è rivolto a studi condotti in campo ematologico, immunologico ed oncologico; alcuni esempi di potenziali applicazioni sono:
o 1) Caratterizzazione di popolazioni cellulari e definizione del signalling a livello delle singole sottopopolazioni cellulari;
o 2) Analisi del ciclo cellulare;
o 2) Identificazioni di popolazioni rare (es. cellule staminali tumorali);
o 3) Identificazione di “biomarcatori” predittivi della risposta alle terapie farmacologiche (come espressione di proteine o distribuzione di sottopopolazioni rare);
o 4) Screening di farmaci ed identificazione del meccanismo di azione;

Nell’unità si stanno mettendo a punto le condizioni necessarie per svolgere anche analisi di popolazioni batteriche.

L’unità è dotata di un CyTOF1 che consente l’acquisizione di anticorpi coniugati con isotopi con un range di masse atomiche da 102 a 193.

Sono disponibili in commercio anticorpi direttamente coniugati 3) o kit per la preparazione di anticorpi coniugati “in-house” 4).

Attualmente l’unità collabora attivamente con l’Università degli Studi di Roma “Tor Vergata” e l’università di Helsinki 5).

Il personale dell’area fornisce assistenza per il disegno sperimentale e lo sviluppo del pannello anticorpale. Qualora non fossero disponibili anticorpi già coniugati, il personale fornisce assistenza per la procedura di coniugazione degli anticorpi di interesse.

Per accedere al servizio è necessario:

  1. Contattare preliminarmente il personale dell'unità di Citometria di Massa;
  2. Verrà concordato un incontro con il personale dell'unità per discutere la domanda scientifica, le modalità, i costi e la tempistica di analisi;
  3. Compilare il modulo online 'Richiesta Servizio' illustrando brevemente la progettualità, tipologia e numero di campioni etc.

Contatto

Luca Pasquini, luca.pasquini@iss.it
Tel. 0649902143-2530-2576-2531
Ed. 15, piano A, St. 1

1) Mass cytometry: technique for real time single cell multitarget immunoassay based on inductively coupled plasma time-of-flight mass spectrometry. https://pubs.acs.org/doi/10.1021/ac901049w
2) Single-Cell Mass Cytometry of Differential Immune and Drug Responses Across a Human Hematopoietic Continuum. https://science.sciencemag.org/content/332/6030/687.long
3) https://www.fluidigm.com/catalog?productLines=cyTOF2Instrument&applications=massCytometry&productTypes=primaryAntibodies
4) https://www.fluidigm.com/catalog?productLines=cyTOF2Instrument&applications=massCytometry&productTypes=labelingKits
5) https://project-hercules.eu/